在分子生物學(xué)實驗中，
反轉(zhuǎn)錄試劑是開展RT-PCR、基因表達分析等實驗的核心耗材，其活性與穩(wěn)定性直接決定實驗結(jié)果的可靠性。不少新手因分裝操作不當(dāng)、保存條件不符，導(dǎo)致試劑失效、實驗重復(fù)失敗，既浪費資源又延誤研究進度。作為實驗室“老手”，結(jié)合多年實操經(jīng)驗，我總結(jié)了反轉(zhuǎn)錄試劑分裝與保存的關(guān)鍵要點，幫你避開常見“坑”。
一、分裝前：做好準(zhǔn)備，避免“開局錯”
反轉(zhuǎn)錄試劑成分復(fù)雜，含逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs、緩沖液等，對溫度、污染極為敏感，分裝前的準(zhǔn)備工作至關(guān)重要。首先要提前規(guī)劃用量，根據(jù)日常實驗頻率確定分裝體積——若每周實驗3-5次，建議將1mL規(guī)格試劑分裝入10-20個200μL離心管，避免單次分裝過多反復(fù)凍融；若實驗頻次低，可采用50μL小體積分裝，減少試劑暴露次數(shù)。
其次需提前準(zhǔn)備專用耗材與設(shè)備：離心管選擇無酶、無RNA酶的進口品牌（如Axygen、Eppendorf），避免國產(chǎn)劣質(zhì)管殘留的酶抑制劑影響活性；移液器需校準(zhǔn)，槍頭同樣選用無酶款，且提前在超凈臺內(nèi)紫外線消毒30分鐘。同時，將分裝用離心管提前標(biāo)記試劑名稱、濃度、分裝日期，避免后續(xù)混淆。
二、分裝中：嚴(yán)格控溫，操作“穩(wěn)準(zhǔn)快”
從-20℃冰箱取出后，需立即放入冰盒（4℃環(huán)境），嚴(yán)禁室溫放置——逆轉(zhuǎn)錄酶在室溫下10分鐘就可能失活30%以上。分裝時全程在超凈臺內(nèi)操作，保持手部穩(wěn)定，避免移液器槍頭觸碰離心管內(nèi)壁，防止交叉污染。
加樣時遵循“慢吸慢打”原則：吸取試劑時移液器按鈕按至第一檔，待液體緩慢進入槍頭后稍作停留，避免產(chǎn)生氣泡；加樣時槍頭貼近離心管底部，緩慢推出液體，減少試劑掛壁。每分裝完一支離心管，立即蓋緊蓋子并放回冰盒，避免長時間暴露在室溫下。全部分裝完成后，將離心管快速放入-80℃冰箱冷凍30分鐘（若長期保存），或直接放入-20℃冰箱短期使用（建議1個月內(nèi)用完）。
三、保存與使用：細節(jié)把控，延長“活性期”
它的保存溫度需嚴(yán)格區(qū)分成分：逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑等酶類試劑，長期保存需置于-80℃冰箱，短期（1周內(nèi)）可放-20℃；dNTPs、緩沖液等非酶類試劑，-20℃冰箱即可長期保存。嚴(yán)禁將試劑反復(fù)凍融——每次使用時從冰箱取出后，立即放入冰盒，待實驗結(jié)束后，剩余試劑需在30分鐘內(nèi)放回對應(yīng)溫度冰箱，每支試劑凍融次數(shù)不超過3次，否則會導(dǎo)致酶活性急劇下降。
此外，保存過程中需注意避光：部分反轉(zhuǎn)錄試劑中的dNTPs對光照敏感，長期暴露會發(fā)生降解，建議將試劑存放在不透光的試劑盒中，或用鋁箔紙包裹離心管。使用前需將試劑在冰盒中緩慢解凍，待全溶解后輕輕顛倒離心管3-5次混勻，避免劇烈振蕩（防止酶變性），混勻后短暫離心（5000rpm，10秒），使試劑集中在離心管底部，再進行后續(xù)實驗。
掌握正確的分裝與保存方法，不僅能延長它的使用壽命，更能保障實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與重復(fù)性。實驗室操作無小事，每一個細節(jié)的把控，都是科研順利推進的關(guān)鍵。
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更新時間：2025-10-16
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